摘    要：目的:了解苏州地区儿童呼吸道人类博卡病毒 (hBoV) 混合感染的情况及混合感染后的临床特征。方法:选取2012-2015年苏州大学附属儿童医院呼吸科因呼吸道感染住院的患儿8 711例, 收集鼻咽分泌物, 应用实时PCR检测hBoV, 逆转录-聚合酶链反应法 (RT-PCR) 检测人类偏肺病毒 (hMPV) 、人类鼻病毒 (hRV) , 直接免疫荧光法检测呼吸道7种常见病毒包括呼吸道合胞病毒 (RSV) 、流感病毒A (InfA) 、InfB、副流感病毒1型 (PinfⅠ) 、PinfⅡ、PinfⅢ、腺病毒 (ADV) 。结果:8 711例标本中, hBoV阳性358例 (4.11%) 。358例hBoV阳性患儿中, 92例 (25.70%) 存在混合感染, 常见混合的病原为hRV、RSV和PinfⅢ。与单纯hBoV感染患儿相比, hBoV混合感染患儿月龄小 (15.8个月vs 20.3个月) 、入院前病程长 (12.1 d vs 9.5 d) 、喘息发生率高(63.04%vs 48.12%) (P均<0.05) , 但两组患儿气促、呼吸困难、紫绀及住院时间比较差异均无统计学意义 (P均>0.05) 。结论:苏州地区儿童hBoV存在一定比例的混合感染, 但混合感染并不加重病情。

关键词：儿童; 人类博卡病毒; 混合感染;

Abstract：Objective: To investigate the situation and clinicalfeatures of human Bocavirus ( hBoV) mixed infection of children in Suzhou area. Methods:From 2012 to 2015, a total of 8, 711 children with respiratory tract infectionwere enrolled from department of respiration, Children's Hospital of SoochowUniversity. We collected the nasopharyngeal secretions, and detected hBoV byreal-time PCR. Reverse transcription-polymerase chain reaction ( RT-PCR) wasused to detect human Metapneumovirus ( h MPV) and human Rhinovirus ( hRV) .Direct immunofluorescence method was used to detect seven common viruses in therespiratory tract including Respiratory syncytial virus ( RSV) , Influenzavirus A ( Inf A) , Inf B, Parainfluenza virus type 1 ( Pinf Ⅰ) , Pinf Ⅱ, Pinf Ⅲ, Adenovirus ( ADV) . Results: Among the 8, 711samples, 358 cases were hBoV positive ( 4.11%) , 92 cases ( 25.70%) were mixedinfection, common mixed infection pathogens were hRV, RSV and Pinf Ⅲ. The mean month age of mixed infection was less thanthat of simple infection ( 15.8 months vs. 20.3 months) . The duration ofadmission in children with mixed infection was longer than that in childrenwith simple infection ( 12.1 d vs. 9.5 d) . The incidence of asthma in childrenwith mixed infection was higher than that in children with simple infection (63.04% vs. 48.12%, P<0.05) , but there were no significant differencesbetween shortness of breath, dyspnea, cyanosis and mean hospitalization day (P>0.05) . Conclusion: There is a certain proportion of mixed infection inhBoV of Suzhouarea, but it does not aggravate the condition.

Keyword：children; human Bocavirus; mixed infection;

人类博卡病毒 (human Bocavirus, h Bo V) 是2005年瑞典科学家Allander首次从小儿下呼吸道感染分泌物中分离到的一种新的人细小病毒[1]。h Bo V是小儿呼吸道感染的重要病原体之一, 易感年龄为6个月~2岁, 可引起支气管肺炎、毛细支气管炎、重症肺炎等。h Bo V感染可单独存在, 也可与其他病毒共同检出。目前对于h Bo V的混合感染方面, 国内外有相关报道, 但多为短期、不连续的研究。本研究应用实时PCR技术检测苏州地区2012-2015年因急性呼吸道感染住院的儿童鼻咽分泌物中的h Bo V, 以探讨h Bov混合感染后的临床特征, 为疾病的诊断与治疗提供参考。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选择苏州大学附属儿童医院呼吸科2012-2015年收治的呼吸道感染住院患儿8711例, 其中男5 426例 (62.29%) , 女3 285例 (37.71%) , 男女比例1.65∶1。

1.2 方法

1.2.1 标本收集

患儿入院后24 h内采用无菌负压抽痰法, 将塑料导管经患儿鼻腔插入7~8 cm达到咽部以下吸取1~2 mL气道分泌物, 放入无菌生理盐水中。标本放置于-20℃冰箱中保存。

1.2.2 病毒病原检测

(1) 实时PCR检测hBoV。 (1) 引物设计:设计合成了扩增h Bo V的VP1蛋白基因的引物, 扩增片断长度为92 bp。引物序列:h BoV-F为5’-TGACATTCAACTACCAACAACCTG-3’;hBo V-R为5’-CAGATCCTr IYr CCTCCTCCAATAC-3’;hBo V-probe为AGCACCACAAAACACCTCAGGGG-TAMRA。 (2) 病毒DNA的提取。 (3) PCR扩增:将用上述引物置于实时荧光PCR自动循环仪扩增, 94℃30s, 56℃30 s, 72℃30s, 40个循环。 (4) 序列测定和分析。 (2)直接免疫荧光法检测呼吸道7种常见病毒, 包括呼吸道合胞病毒(RSV) 、流感病毒A (Inf A) 、Inf B、副流感病毒1型 (PinfⅠ) 、PinfⅡ、PinfⅢ、腺病毒 (ADV), 试剂盒购自美国Chemicon公司, 按说明书进行操作, 按阳性标准判断结果。 (3) RT-PCR检测人类鼻病毒(human Rhinovirus, hRV) 、人类偏肺病毒 (human Metapneumovirus, h MPV) 。Trizol由Invitrogen公司提供, 逆转录酶M-MLV和Taq酶由Promgea公司提供, 引物由上海生物工程技术服务有限公司合成。

1.3 统计学方法

应用SPSS17.0软件, 计数资料采用χ检验或Fisher精确概率法检验, P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 hBoV混合感染情况

8 711例标本中, h Bo V阳性358例 (4.11%) 。358例h Bo V阳性患儿中, 92例 (25.70%) 存在混合感染, 混合的病原包括hRV (41例) 、RSV (30例) 、PinfⅢ (9例) 、Inf A (7例) 、PinfⅠ (2例) 、Inf B (2例) 和h MPV (1例) 。

2.2 hBoV单纯感染与混合感染患儿的临床资料比较

与单纯h Bo V感染患儿相比, h BoV混合感染患儿月龄较小 (15.8个月vs 20.3个月) 、入院前病程长 (12.1 d vs 9.5 d) 、喘息发生率高(63.04%vs 48.12%) , 两组比较差异有统计学意义 (P均<0.05) ,但两组患儿气促、呼吸困难、紫绀发生率及住院时间 (8.1 d vs 8.5 d) 比较差异均无统计学意义 (P均>0.05) 。见表1。

表1 h Bo V单纯感染与混合感染的临床资料比较    下载原表

表1 h Bo V单纯感染与混合感染的临床资料比较

2.3 hBoV感染重症病例情况

358例hBoV阳性患儿中, 重症肺炎29例 (8.10%) 。29例重症肺炎患儿年龄 (11.6±0.9) 个月, 其中<6个月2例 (6.90%) ,6~12个月16例 (55.17%) ,>1~2岁11例 (37.93%);4例伴有心功能不全, 5例伴有呼吸衰竭;12例由PICU转出, 1例接受过呼吸机辅助通气2d;重症患儿经治疗均好转出院, 住院时间9 (3,36) d。

3讨论

hBoV是小儿时期常见的呼吸道感染病原体之一, 既可单独存在, 也可与其他病毒混合感染, 混合感染率18%~90%, 常与h Bo V共同检出的病毒有RSV、h MPV、hRV等[2]。本组资料中, h Bo V混合感染率25.70%,混合的病毒主要为hRV、RSV、PinfⅢ等。hRV感染高峰期是春秋季, 11月份检出率较高, 与h Bo V的检出高峰相近, 易与h Bo V混合感染[3]。吴占国等[4]报道, 北京地区h Bo V混合感染率为18.42% (7/38) 。Garcia M L等[5]发现, 呼吸道感染患儿h BoV混合感染率高达65% (99/153) 。严华杰等[6]认为, h Bo V混合感染率高与h Bov感染后引起呼吸道局部免疫功能失调增加了其他病毒感染的机会有关。

本研究中, 与hBoV单纯感染患儿相比, 混合感染患儿月龄小、入院前病程长、喘息发生率高, 但在住院时间、发热、咳嗽及气促发生率等方面比较, 差异无统计学意义, 提示h Bo V与其他呼吸道病毒混合感染并没有加重病情。Maggi F等[7]认为, hBoV感染在呼吸道感染致病机制中起协同作用, hBoV与其他病毒混合感染可能会加重病情。hBoV可能是呼吸道的携带菌而并非致病菌, h Bo V混合感染的致病机制需要进一步的研究来明确[8]。

孟加拉学者[9]报道, hBoV可导致重症脑炎, 且有死亡病例, 说明hBoV是可导致重症感染的病原体之一。本研究hBoV阳性患儿中重症病例占8.10%(29/358) , 重症患儿年龄均在2岁以内, 提示h Bo V感染、低龄 (<2岁) 可能是发生重症的原因。

综上所述, hBoV是苏州地区小儿呼吸道感染的常见病原体之一, 存在一定的混合感染, 可引起重症感染。了解hBo V混合感染的临床特征, 可以为疾病的诊治提供参考。

参考文献

[1]ALLANDER T,TAMRM M T, EFIKSSON M, et al.Cloning of a human parvovirus by malecatarscreening of respiratory tract samples[J].Proc Natl Acad Sci USA, 2005, 102(36) :12891-12896.

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[3]王涛, 张兵, 肖霓光, 等.RSV与HRV在ALRTI住院儿童中的流行状况和临床特征比较[J].湖南师范大学学报 (医学版) , 2012, 9 (2) :28-32.

[4]吴占国, 李爱华, 张铁钢, 等.北京地区6岁以下儿童急性呼吸道感染病例人博卡病毒流行状况分析[J].疾病监测, 2016, 31 (1) :24-28.

[5]GARCIA M L,CALVO C, POZO F, et al.Detection of human bocavirus in ill and healthy Spanishchildren:a 2-year study[J].Arch Dis Child, 2008, 28 (5) :906-912.

[6]严华杰, 盛军, 董蔚, 等.90例儿童人博卡病毒感染临床分析[J].中国当代儿科杂志,2011, 13 (4) :300-302.

[7]MAGGI F,ANDREOLI E, PIFFERI M, et al.Human bocavirus in Italian patients withrespiratory diseases[J].J Clin Virol, 2007, 38 (4) :321-325.

[8]SCHILDGEN O,MULLER A, ALLANDER T, et al.Human bocavirus:passenger or pathogen in acuterespiratory tract infections?[J].Clin Microbiol Reviews, 2008, 21 (2) :291-304.

[9]MITUI M T, TABIBS M, MATSUMOTO T, et al.Detection of human bocavirus in the cerebrospinal fluidof chidren with encephalitis[J].Clinical infectious diseases, 2012, 54 (7):964-967.